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电热恒温培养箱和CO2培养箱在体外细胞培养中的使用

体外培养的细胞与体内细胞一样,需要在合适的温度和pH下生存。培养工作既可在培养箱(culture incubator)中进行,也可在控温温室中进行,若一或两台培养箱就能满足需要,那么用培养箱是相对经济且节省空间的最好途径。常用的培养箱包括电热恒温培养箱、湿式CO2培养箱厌氧培养箱

1.电热恒温培养箱

培养箱要具有较高的温度灵敏度。一般选购隔水式或晶体管式控温培养箱,该培养箱灵敏度高,温度控制较恒定。根据工作原理可将电热恒温培养箱分为隔水式和气套式两种。电热恒温培养箱价格较便宜,但只适于细菌培养和封闭式细胞培养,并常用于有关细胞培养器材和试剂的预温和恒定。

2.CO2培养箱

CO2培养箱是细胞培养水平提高和培养器皿多样化后提出的高要求产物,它除有恒温培养箱的性能外,还能够恒定供应细胞培养时所需要的CO2(一般浓度5%),维持培养液酸碱度稳定,适于开放或半开放培养。此外,还具有杀菌、安全等其他完善的辅助功能,故在动物细胞培养、病毒增殖、细菌培养中被广泛采用。CO2培养箱种类繁多,根据工作原理,可分为气套式CO2培养箱、水套式CO2培养箱、红外CO2培养箱、高温灭菌培养箱、光照低温培养箱、恒温恒湿培养箱等。CO2培养箱价格较贵,但使用方便,CO2分压和温度容易控制。CO2浓度通过CO2检测装置控制,空气通过自然对流在培养箱内循环,以保持CO2水平和温度均一。当使用不透气瓶盖培养瓶时,可将瓶盖稍微旋松,使之与外界保持通气状态,因此培养箱内空气必须保持清洁。为避免污染,要定期用紫外线灯照射或者75%乙醇擦拭对培养箱进行消毒。另外,要维持箱内温度、湿度恒定,可用无菌蒸馏水定期注入外箱内,或将无菌潮湿的纱布置于托盘内,然后放入CO2培养箱,使箱内始终保持稳定的相对湿度,防止培养液蒸发而影响细胞的生长。

培养箱大小的选择由使用人数和培养物类型决定。当多人同时进行细胞培养时,可以选用一个中型培养箱(可同时放置1 000个细胞培养板,或存放完成10次实验所需要的培养物)。若人员较少,则一台小型培养箱就可满足需要。CO2培养箱,特别是有加湿器的CO2培养箱必须经常清洗。所以,内部应易于拆卸,不留难以清洁的缝隙和死角。培养物从培养箱取到洁净台或其他无菌台使用时,应用酒精擦拭培养瓶、培养皿或装它们的箱子,然后再进行下一步操作。


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