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生物菌种的活化和扩大培养方法与保藏

     菌种的制备是指将保存的菌种进行活化,再经摇瓶或种子罐等逐级扩大的过程。种子扩大培养增加菌体的数量,满足工业化生产对大量菌种的需求。菌体达到一定浓度不仅是高效率和高质量生产的保证,而且是缩短发酵周期、降低生产成本的必然要求。种子扩大培养可以提升种子生产性能。首先,通过营养物质的充分供应和适宜环境的控制,可激发菌体的新陈代谢活力,让菌体生长代谢旺盛;其次,在扩大培养过程中通过调节培养基组成、发酵温度、pH等因素逐步向生产阶段的真实环境逼近,调理菌体的代谢,让菌体在快速增殖的同时使菌体的各项生理性能向最适宜生产需要的方向趋近。菌种经过扩大培养后,以优势菌进行生产,可以减小杂菌污染概率,减少“倒罐”现象,这是成功生产的保障。

菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本资料,因此,菌种保藏是一项重要的基础性工作。菌种保藏主要是根据微生物的生理生化特点,人工创造条件,使孢子或菌体的生长代谢活动尽量降低,以减少其变异。


需要的器材与试剂

1.器材

恒温培养箱,恒温摇床,250mL锥形瓶,无菌移液器,接种环,无菌甘油,无菌离心管(5mL)等。

2.试剂

菌种:酵母(Candida sp.)。

培养基:葡萄糖20.0g/L,酵母膏6.0g/L,磷酸二氢钾5.0g/L,硫酸镁0.25g/L,pH 5;固体培养基另加琼脂20g/L。


菌种的培养和保藏

1.菌种的活化

将冰箱保藏的斜面菌种用接种环转接入新鲜的斜面培养基后,28℃恒温培养48h。如果冰箱保藏菌种活力较低,可以重复上述操作进行多次传代培养,以恢复菌种的活力。

2.菌种的扩大培养

将活化好的酵母菌转接入装有液体培养基的锥形瓶中,250mL锥形瓶中的装液量为30~50mL,接种量为一环;在恒温摇床里28℃恒温振荡培养48h,摇床转速为170~200r/min。

3.菌种的保藏

(1)斜面保藏 将恢复生长活力的斜面菌种放入冰箱中进行低温保藏。要求在30天左右进行传代复活培养。

(2)甘油保藏 用无菌移液器取2mL生长良好的发酵液,于超净工作台上转入无菌离心管中,然后加入1mL无菌甘油,盖紧顶盖后于振动器上将甘油和发酵液混合均匀。迅速置于-70℃冷冻保藏


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