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水浴锅在DNA片段的纯化与回收中的应用

水浴锅在DNA片段的纯化与回收中的应用

1.从琼脂糖凝胶中回收DNA片段

(1)柱平衡步骤:向吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中)加入500μl的平衡液BL,12000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

(2)将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中,称取重量。

(3)向胶块中加入等倍体积溶液PC,50℃水浴锅放置10min,其间不断温和地上下翻转离心管,以确保胶块充分溶解。

(4)将上一步所得溶液加入一个吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中),12000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CB2放入收集管中。

(5)向吸附柱CB2中加入500μl漂洗液PW,12000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CB2放入收集管中。

(6)重复操作步骤(5)。

(7)将吸附柱CB2放入收集管中,12000rpm离心2min,尽量除去漂洗液。将吸附柱置于室温放置数分钟,彻底晾干。

(8)将吸附柱CB2放入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液EB,室温放置2min。

(9)12000rpm离心2min,收集DNA溶液。

2.从PCR反应液或酶切反应液中回收DNA

(1)柱平衡步骤:向吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中)加入500μl的平衡液BL,12000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

(2)估计PCR反应液或酶切反应液的体积,向其中加入等倍体积溶液PC,充分混匀。

(3)将上一步所得溶液加入一个吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中),室温放置2min,12000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放入收集管中。

(4)向吸附柱CB2中加入500μl漂洗液PW,12000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CB2放入收集管中。

(5)重复操作步骤(4)。

(6)将吸附柱CB2放回收集管中,12000rpm离心2min,尽量除去漂洗液。将吸附柱CB2室温放置数分钟,彻底晾干。

(7)将吸附柱CB2放入一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液EB,室温放置2min。

(8)12000rpm离心2min,收集DNA溶液。


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