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干燥箱在血清TG测定中的应用

用二氯甲烷抽提血清TG,同时加入硅酸去除磷脂、游离甘油、甘油一酯、部分甘油二酯及蛋白。TG经氢氧化钾皂化生成甘油,酸化后以过碘酸氧化甘油产生甲醛,用亚砷酸还原过剩的过碘酸后,甲醛与变色酸在硫酸溶液中加热产生紫红色反应,进行比色测定。本法根据Van Handel等( 1957) 及Carlson法( 1963)改进而来。

1.抽提试剂

( 1)二氯甲烷( HPLC级)。

( 2)生理盐水。

( 3)硅酸:用去离子水洗3次,去除细颗粒,然后用甲醇洗2次,用布氏漏斗( Whatman #42滤纸)过滤,空气干燥。用前置65℃干燥箱烘干至少72小时,干燥器内贮存。

2.皂化试剂 ( 1) 0.25% KOH乙醇液:

制备5% KOH水溶液100ml,取5ml用无水乙醇稀释至100ml,临用当天配制,用超声波去气泡。

( 2) 0.1mol/L H2SO4:

浓H2SO46.0ml用蒸馏水稀释至1L。

3.氧化、还原、显色试剂过碘酸钠( NaIO4) :

将1.34g NaIO4溶于1L蒸馏水中。

( 2)亚砷酸钠( As2O3) :

将11.25g NaOH溶于约100ml蒸馏水中,未冷却前加入25g As2O3,最后用蒸馏水稀释成250ml。

( 3)变色酸显色剂

1) 4mol/L H2SO4:将浓H2SO4444ml慢慢地加入至1500ml蒸馏水中,在冰水浴中配制,待完全冷却后,加水至终体积2L。

2)显色剂: 400ml蒸馏水中,加入5g变色酸,加入4mol/L H2SO4至2L。

4.标准液

标准物质为三油酸酯及三软脂酸酯。

( 1)贮存液(含2mg/L)

1)称三油酸酯200mg,溶于二氯甲烷至100ml。

2)称三软脂酸酯100mg,溶于二氯甲烷至50ml。

将上述两液按2∶1的比例充分混合,此液含TG 2.327mmol/L。

( 2)工作液:

由贮存液稀释至所需浓度。

( 3)剂量响应曲线:

工作液( S1~S5)各10ml,分别加入硅酸2g、生理盐水0.5ml后,与标本同样处理,绘制剂量响应曲线。线性范围超过3.723mmol/L则不可靠。任何标本值高于此水平时,应稀释后重新操作。

( 4)稳定性:

标准贮存液与工作液应放置4℃冰箱中,用带塞的容器,以特氟隆( Teflon)条密封,每次取用后应立即加盖,并及时放进冰箱,可稳定6个月。超过6个月,因溶剂挥发可导致标准读数值增高。


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